Abstrak
RNA mengatur berbagai proses seluler menggunakan struktur 3D yang dapat dibentuk, dan memahami faktor-faktor yang mengendalikan struktur dan dinamika RNA sangat penting untuk memahami mekanisme aksinya. Untuk mengurangi faktor-faktor yang telah membatasi studi RNA besar yang relevan secara fungsional dengan spektroskopi NMR larutan, kami telah memperluas pendekatan korelasi 1H-15N yang ditingkatkan 2H yang baru-baru ini dijelaskan dengan mengembangkan teknologi pelabelan kemoenzimatik yang mencangkokkan [9-15N]-Guanin yang diberi label secara selektif ke ribosa yang diberi label untuk membuat [9-15N]-GTP. Pendekatan kami memanfaatkan sifat-sifat NMR yang menguntungkan dari inti N9 yang, ketika dikombinasikan dengan deuterasi ribosa yang luas dan urutan pulsa NMR yang dioptimalkan, menghasilkan sinyal yang tajam tanpa komplikasi yang dapat muncul menggunakan pelabelan [15N]-guanin yang seragam. Kegunaan pendekatan untuk penugasan sinyal NMR dan analisis dinamika ditunjukkan untuk tiga RNA besar (20-78 kDa) yang memainkan peran penting dalam replikasi virus. Dengan pendekatan ini, studi NMR terhadap RNA yang terdiri dari 200 nt atau lebih sekarang seharusnya dapat dilakukan.