ABSTRAK
Dalam penelitian ini, kami menggunakan pendekatan yang dibantu protein fusi untuk mengkristalkan SUMO1 manusia, pengubah protein kovalen esensial yang juga berinteraksi secara nonkovalen dengan motif protein linier spesifik yang disebut motif interaksi SUMO (SIM). SUMO1 telah dikristalkan sebelumnya sebagai bagian dari berbagai kompleks tetapi tidak pernah secara terpisah. Strategi kami melibatkan penggabungan varian fasilitator kristalisasi yang diketahui, domain TELSAM, di hulu bagian terlipat dari protein SUMO1 (residu 18–97). Dengan mengikuti strategi pemurnian sederhana, kami memperoleh struktur kristal 2,05-Å dari apo TELSAM-SUMO1, dengan tiga rantai SUMO1 berbeda per unit asimetris, dua di antaranya memiliki kantong yang dapat diakses untuk mengikat SIM. Struktur kristal tersebut tersusun dari filamen heliks kidal yang diharapkan terbentuk oleh domain TELSAM, dengan molekul SUMO1 yang menonjol memediasi koneksi di dalam dan di antara filamen ini untuk menstabilkan kisi tiga dimensi. Karena fusi TELSAM tidak memengaruhi interaksi SUMO:SIM, seperti yang dikonfirmasi dalam solusi, konstruksi kami berpotensi digunakan untuk mengkarakterisasi secara struktural kompleks yang terbentuk antara SUMO dan peptida yang mengandung SIM. Fusi TELSAM juga tidak mengganggu perlekatan SUMO1 ke substrat, yang berpotensi memungkinkan terciptanya bentuk protein SUMOylated dengan kristalisasi yang lebih baik. Studi ini merupakan aplikasi baru kristalisasi berbantuan TELSAM pada protein kecil yang sangat relevan secara biologis.