Abstrak
Serangkaian turunan adenosin trifosfat yang mengandung gugus kloro, fluoro, amino, metil, vinil, dan etinil pada posisi 2 disintesis dan diuji sebagai substrat untuk RNA dan DNA polimerase. Nukleotida yang dimodifikasi bekerja dengan baik dalam transkripsi in vitro dengan polimerase T7 dan ekstensi primer (PEX) menggunakan polimerase DNA yang direkayasa (TGK, 2M) kecuali untuk turunan 2-vinil- dan 2-etinil-ATP yang lebih besar yang menghasilkan produk terpotong. Namun, dalam penggabungan nukleotida tunggal diikuti oleh PEX, mereka masih dapat digunakan untuk penggabungan spesifik lokasi modifikasi reaktif ke dalam RNA yang selanjutnya dapat digunakan untuk pelabelan pasca-sintesis melalui reaksi tiol-ena atau CuAAC. Semua ATP yang dimodifikasi bekerja dalam poliadenilasi yang dikatalisis oleh poli(A) polimerase (ScPAP) untuk membentuk ekor 3′-poliA panjang yang mengandung modifikasi yang juga dapat digunakan untuk pelabelan.